¿Que é a análise de PCR?
A análise da reacción en cadea da polimerase (PCR) é unha técnica de laboratorio destinada a identificar pequenas cantidades de ADN nunha mostra por un proceso coñecido como amplificación . Durante a amplificación por PCR, o ADN de interese copiase repetidamente ata que o suficiente para a súa análise e detección. Por exemplo, a PCR pode usarse para identificar pequenas cantidades de ADN dos organismos que causan gonorrea ou clamidia que están presentes nunha mostra de orina .
Como funciona PCR?
O primeiro paso na PCR é a de quentar a mostra para que o ADN bicatenario se separe en dúas fendas únicas: iso chámase desnaturalización . A continuación, os primers , as mostras curtas de ADN que coinciden cos extremos da secuencia de ADN de interese, combínanse co ADN da mostra. Despois diso, úsase unha ADN polimerase para iniciar a replicación do ADN no lugar do primeiro. Finalmente, o ADN se quenta para separar os fíos unha vez máis, e todo o proceso de PCR comeza de novo.
A cantidade do segmento de ADN de interese presente na mostra aumenta de xeito exponencial con cada ciclo de PCR: unha copia convértese en dúas, despois convértese en catro, entón faise oito, etc. polo xeral, só se necesitan de 20 a 40 ciclos para determinar se o ADN en cuestión está presente (e, se é o caso, proporcionar unha mostra suficiente para a súa análise).
Todos os pasos dunha reacción en cadea de polimerase - desnaturalizando o ADN, aplicando os cebadores e alongando o ADN - ocorren a diferentes temperaturas, entón despois de que a mestura inicial se xunta, os pasos poden ser controlados a través dun proceso coñecido como termociclado , en que a temperatura se realiza nos niveis necesarios por tempo suficiente para que cada paso se realice.
Así, a PCR é unha forma eficaz de amplificar a cantidade de ADN diana nun único tubo de proba con pouca necesidade de intervención humana.
A reacción en cadea da polimerase representou unha revolución na técnica biolóxica cando se desenvolveu por primeira vez a principios dos 80, eo creador da PCR, Kary Mullis, gañou o Premio Nobel de Química polo seu traballo en 1993.
¿Por que a PCR é relevante para a proba de ETS?
A reacción en cadea da polimerase e as técnicas relacionadas como a reacción en cadea da ligasa están demostrando ser de crecente importancia para as probas de ETS. Isto ocorre porque estas técnicas poden identificar directamente pequenas cantidades de ADN viral ou ARN nas mostras. A identificación do código xenético dun patóxeno non require que o patóxeno estea vivo, como a cultura bacteriana ou a cultura viral . Tampouco require que a infección se produciu hai tempo suficiente para que as persoas desenvolveran unha reacción detectabel de anticorpos (como a detecta ELISA ). Isto significa que as técnicas de PCR ás veces poden detectar enfermidades antes que outras probas, e sen tanto se preocupe en manter viva as mostras ou probalo exactamente no momento.