O xenotipado e o fenotipo poden identificar e mesmo prever a resistencia ao VIH
Incluso para as persoas con óptima adherencia á terapia, espérase que se desenvolva un certo grado de resistencia ao fármaco contra o VIH a través do tempo debido a mutacións naturais do virus. Noutros casos, a resistencia pode desenvolverse rapidamente cando a adherencia subóptima permite que as poboacións de VIH resistentes prosperen, levando eventualmente ao fracaso do tratamento.
Cando se produce un falla no tratamento, cómpre seleccionar combinacións alternativas de medicamentos para eliminar esta nova poboación de virus resistentes.
As probas de resistencia xenética axudan a facilitar isto identificando os tipos de mutacións resistentes na "piscina viral" dunha persoa, ao mesmo tempo verificar como son susceptibles estes virus a posibles axentes antirretrovirales .
Utilízanse dúas ferramentas primarias para a proba de resistencia xenética no VIH: a análise xenotípica do VIH eo ensaio fenotipo do VIH .
¿Que é un xenotipo e un fenotipo?
Por definición, un xenotipo é simplemente a composición xenética dun organismo, mentres que un fenotipo é as características ou trazos observables dese organismo.
Os ensaios xenotípicos (ou xenotipos) funcionan identificando as instrucións herdadas dentro da codificación xenética dunha célula, ou ADN. Os ensaios fenotípicos (ou fenotipos) confirman a expresión destas instrucións baixo a influencia de diferentes condicións ambientais.
Mentres que a asociación entre o xenotipo eo fenotipo non é absoluta, o xenotipado adoita ser predictivo do fenotipo, especialmente cando os cambios no código xenético confiren aos cambios esperados en características ou características, como no caso do desenvolvemento da resistencia ao fármaco.
O fenotipo, por outra banda, confirma o "aquí e agora". Pretende avaliar a reacción dun organismo a cambios específicos na presión ambiental, como cando o VIH está exposto a diferentes medicamentos e / ou concentracións de medicamentos.
Explicando a xenotipificación do VIH
O xenotipado do VIH é xeralmente a tecnoloxía máis común utilizada para a proba de resistencia.
O obxectivo do ensaio é detectar mutacións xenéticas específicas na rexión gag-pol do xenoma do virus (ou código xenético). Esta é a rexión onde as transcriptases inversas, proteasas e integrasas -as metas da maioría dos fármacos antirretrovirales- están codificadas na cadea de ADN.
Ao primeiro amplificar o xenoma do VIH usando a tecnoloxía de reacción en cadea da polimerase (PCR) , os técnicos de laboratorio poden secuenciar (ou "mapear") a xenética do virus usando varias tecnoloxías de detección de mutación.
Estas mutacións (ou acumulación de mutacións) son interpretadas por técnicos que analizan a relación entre as mutacións identificadas ea susceptibilidade esperada do virus a diferentes fármacos antirretrovirales. As bases de datos en liña poden axudar a comparar a secuencia de proba coa dun prototipo de tipo "tipo salvaxe" (isto é, o VIH que non contén mutacións resistentes).
A interpretación destes ensaios úsase para determinar a susceptibilidade do fármaco, co maior número de mutacións clave que confiren a niveis máis altos de resistencia ás drogas .
Explicando o fenotipo do VIH
O fenotipo do VIH avalía o crecemento do VIH da persoa na presenza dun fármaco e, a continuación, compárase co crecemento dun virus de tipo control e doutro tipo.
Do mesmo xeito que nos ensaios xenotípicos, as probas fenotípicas amplifican a rexión gag-pol do xenoma do VIH.
Esta sección do código xenético é entón "injertada" nun clon de tipo salvaxe usando tecnoloxía de ADN recombinante . O virus recombinante resultante úsase para infectar células de mamíferos in vitro (no laboratorio).
A mostra viral exponse entón a concentracións crecentes de diferentes fármacos antirretrovirales ata o 50% eo 90% da supresión viral. As concentracións son entón comparadas cos resultados do control, mostra de tipo salvaxe.
Os cambios relativo "dobrar" proporcionan o rango de valores polo que se determina a susceptibilidade do fármaco. Un cambio de catro veces significa simplemente que catro veces máis a cantidade de medicamento foi necesaria para lograr a supresión viral en comparación coa do tipo salvaxe.
Canto maior sexa o valor de dobraxe, o menos susceptible é o de un medicamento específico.
Estes valores sitúanse dentro de rangos clínicos e clínicos superiores clínicos, con valores superiores que confiren a niveis máis altos de resistencia ás drogas. (Ver informe de mostra .)
Cando se realiza unha proba de resistencia xenética?
Nos EE. UU., As probas de resistencia xenética realízanse tradicionalmente en enfermos inxectados de tratamento para determinar se teñen algunha "adquisición" de drogas. Os estudos nos EE. UU. Suxiren que entre o 6% e o 16% do virus transmitido será resistente a polo menos un fármaco antirretroviral, mentres que case o 5% será resistente a máis dunha clase de fármaco.
A proba de resistencia xenética tamén se usa cando se sospeita a resistencia a medicamentos en individuos con terapia. As probas realízanse mentres o paciente toma o réxime de falla ou dentro de catro semanas de descontinuación do tratamento se a carga viral supera as 500 copias / ml. As probas xenotípicas adoitan ser preferidas nestes casos, xa que custan menos, teñen un tempo de resposta máis rápido e ofrecen maior sensibilidade para detectar mesturas de virus de tipo salvaxe e resistentes.
Unha combinación de probas fenotípicas e xenotípicas é xeralmente preferida para persoas con resistencia complexa e multiprofesional, especialmente para aqueles expostos a inhibidores da proteasa .
Fontes:
Organización Mundial da Saúde (OMS). "Folla informativa sobre a resistencia ao VIH". Xenebra, Suíza; 11 de abril de 2011.
Kim, D .; Ziebell, R .; Saduvala, N .; et al. "Tendencia nas mutacións asociadas a resistencia ao fármaco ARV transmitidas por VIH-1: 10 áreas de vixilancia do VIH, EE. UU., 2007-2010". XX Conferencia sobre retrovirus e infeccións oportunistas. Atlanta, Georgia; 6 de marzo de 2013; Resumen oral 149.
Institutos Nacionais de Saúde (NIH). "Directrices para o uso de axentes antirretrovirales en adultos e adolescentes infectados polo VIH-1". Bethesda, Maryland; 11 de outubro de 2013.